Aqui podemos observar el principio de la microscoía y asu aplicación
http://www.biologia.edu.ar/microscopia/microscopia1.htm
martes, 27 de enero de 2009
Microscopía
Aqui veremos lo relaciona a la microscopía y su importancia en el estudio que realiza la Histología
http://www.biologia.edu.ar/microscopia/index.htm
http://www.biologia.edu.ar/microscopia/index.htm
Microscopia de polarización
Aqui veremos lo importante de este tipo de microscopia
http://www.uned.es/cristamine/crist_opt/cropt_micro.htm
http://www.uned.es/cristamine/mineral/metodos/prop_micr.htm
Checalas porque de aqui saldran preguntas para el examen
http://www.uned.es/cristamine/crist_opt/cropt_micro.htm
http://www.uned.es/cristamine/mineral/metodos/prop_micr.htm
Checalas porque de aqui saldran preguntas para el examen
jueves, 22 de enero de 2009
Microsocopio complemento de su importancia y tipos
El microscopio electrónico
Invención del microscopio electrónico
En 1932, Bruche y Johnsson construyen el primer microscopio electrónico a base de lentes
electrostáticas. Ese mismo año Knoll y Ruska dan a conocer los primeros resultados
obtenidos con un microscopio electrónico Siemens, construido con lentes magnéticas. Así
nace el microscopio electrónico. Para 1936 ya se ha perfeccionado y se fabrican
microscopios electrónicos que superan en resolución al microscopio óptico.
En 1932, Bruche y Johnsson construyen el primer microscopio electrónico a base de lentes
electrostáticas. Ese mismo año Knoll y Ruska dan a conocer los primeros resultados
obtenidos con un microscopio electrónico Siemens, construido con lentes magnéticas. Así
nace el microscopio electrónico. Para 1936 ya se ha perfeccionado y se fabrican
microscopios electrónicos que superan en resolución al microscopio óptico.
Estos logros no sólo representan un avance en el campo de la electrónica, sino también en
el campo de la Biología, pues son muchas las estructuras biológicas que se han descubierto
y que revelan detalles inusitados, al observarlas al microscopio electrónico.
el campo de la Biología, pues son muchas las estructuras biológicas que se han descubierto
y que revelan detalles inusitados, al observarlas al microscopio electrónico.
Funcionamiento del microscopio electrónico
El microscopio electrónico utiliza un flujo de electrones en lugar de luz. Consta
fundamentalmente de un tubo de rayos catódicos, en el cual debe mantenerse el vació. El
cátodo está constituido por un filamento de tungsteno, que al calentarse eléctricamente
emite los electrones, los cuales son atraídos hacia el ánodo por una diferencia de potencial
de 50.000 a 100.000 voltios. La lente del condensador enfoca este haz y lo dirige hacia el
objeto que se observa, cuya preparación exige técnicas especiales. Los electrones chocan
contra la preparación, sobre la cual se desvían de manera desigual.
fundamentalmente de un tubo de rayos catódicos, en el cual debe mantenerse el vació. El
cátodo está constituido por un filamento de tungsteno, que al calentarse eléctricamente
emite los electrones, los cuales son atraídos hacia el ánodo por una diferencia de potencial
de 50.000 a 100.000 voltios. La lente del condensador enfoca este haz y lo dirige hacia el
objeto que se observa, cuya preparación exige técnicas especiales. Los electrones chocan
contra la preparación, sobre la cual se desvían de manera desigual.
Con el objetivo se enfoca la imagen, que es ampliada por la lente de proyección. Para
variar los aumentos en el microscopio electrónico basta variar la distancia focal de la lente
proyectora. Como los electrones no impresionan la retina del ojo humano, debe recogerse
la imagen del microscopio electrónico en una pantalla fluorescente, la cual posee una
superficie impregnada con fósforo o sulfuro de cinc. La imagen obtenida en esta pantalla
puede fotografiarse.
variar los aumentos en el microscopio electrónico basta variar la distancia focal de la lente
proyectora. Como los electrones no impresionan la retina del ojo humano, debe recogerse
la imagen del microscopio electrónico en una pantalla fluorescente, la cual posee una
superficie impregnada con fósforo o sulfuro de cinc. La imagen obtenida en esta pantalla
puede fotografiarse.
Se acostumbra utilizar el término microfotografías para las fotografías tomadas a través
del microscopio óptico y micrografía o electromicrografia para las que se toman en el
microscopio electrónico.
del microscopio óptico y micrografía o electromicrografia para las que se toman en el
microscopio electrónico.
Los aumentos máximos conseguidos en el microscopio electrónico son del orden de
2.000.000 (¡dos millones de aumento!) mediante el acoplamiento al microscopio
electrónico de un amplificador de imagen y una cámara de televisión. En resumen, el
microscopio electrónico consta esencialmente de:
2.000.000 (¡dos millones de aumento!) mediante el acoplamiento al microscopio
electrónico de un amplificador de imagen y una cámara de televisión. En resumen, el
microscopio electrónico consta esencialmente de:
Un filamento de tungsteno (cátodo) que emite electrones. Condensador o lente
electromagnética, que concentra el haz de electrones. Objetivo o lente electromagnética,
que amplía el cono de proyección del haz de luz. Ocular o lente electromagnética, que
aumenta la imagen. Proyector o lente proyectora. que amplía la imagen. Pantalla
fluorescente, que recoge la imagen para hacerla visible al ojo humano. Tipos de
electromagnética, que concentra el haz de electrones. Objetivo o lente electromagnética,
que amplía el cono de proyección del haz de luz. Ocular o lente electromagnética, que
aumenta la imagen. Proyector o lente proyectora. que amplía la imagen. Pantalla
fluorescente, que recoge la imagen para hacerla visible al ojo humano. Tipos de
Microscopios Electrónicos Existen varios tipos de microscopios electrónicos, que cada día
se perfeccionan más.
se perfeccionan más.
El microscopio electrónico de transmisión que utiliza un haz de electrones acelerados por
un alto voltaje (cien mil voltios). Este haz ilumina una sección muy fina de la muestra,
sean tejidos, células u otro material.
un alto voltaje (cien mil voltios). Este haz ilumina una sección muy fina de la muestra,
sean tejidos, células u otro material.
El microscopio electrónico de barrido se utiliza para el estudio de la morfología y la
topografía de los elementos. Estos instrumentos utilizan voltajes cercanos a los 20.000
voltios. Las lentes magnéticas utilizan un haz muy fino de electrones para penetrar
repetidamente la muestra, y se produce una imagen ampliada de la superficie observada en
la pantalla de un monitor. El microscopio electrónico mixto tiene propiedades comunes
con el de transmisión y con el de barrido y resulta muy útil para ciertas investigaciones.
topografía de los elementos. Estos instrumentos utilizan voltajes cercanos a los 20.000
voltios. Las lentes magnéticas utilizan un haz muy fino de electrones para penetrar
repetidamente la muestra, y se produce una imagen ampliada de la superficie observada en
la pantalla de un monitor. El microscopio electrónico mixto tiene propiedades comunes
con el de transmisión y con el de barrido y resulta muy útil para ciertas investigaciones.
Hay otros microscopios analíticos que detectan señales características de los elementos
que constituyen la muestra.
que constituyen la muestra.
Con estos poderosos instrumentos, que utilizan el flujo de electrones y las radiaciones
electromagnéticas así como la aplicación de técnicas histoquímicas y bioquímicas, además
del empleo de marcadores radiactivos, se han logrado grandes avances en la biología
celular.
electromagnéticas así como la aplicación de técnicas histoquímicas y bioquímicas, además
del empleo de marcadores radiactivos, se han logrado grandes avances en la biología
celular.
Microscopio electrónico de barrido
El microscopio electrónico de barrido está situado a la izquierda del operador, y las
imágenes computerizadas de la muestra se ven en la pantalla de la derecha. Aunque un
microscopio electrónico de transmisión puede resolver objetos más pequeños que uno de
barrido, este último genera imágenes más útiles para conocer la estructura tridimensional
de objetos minúsculos.
imágenes computerizadas de la muestra se ven en la pantalla de la derecha. Aunque un
microscopio electrónico de transmisión puede resolver objetos más pequeños que uno de
barrido, este último genera imágenes más útiles para conocer la estructura tridimensional
de objetos minúsculos.
Microscopio quirúrgico
El empleo de microscopios quirúrgicos ha permitido que los cirujanos lleven a cabo
intervenciones que parecían imposibles, como la reimplantación de un miembro y la
cirugía de los ojos y oídos. Estos microscopios son en especial útiles cuando es necesario
realinear para unir o reparar fibras nerviosas y vasos sanguíneos individuales.
intervenciones que parecían imposibles, como la reimplantación de un miembro y la
cirugía de los ojos y oídos. Estos microscopios son en especial útiles cuando es necesario
realinear para unir o reparar fibras nerviosas y vasos sanguíneos individuales.
Medición a través del microscopio
Muchas veces interesa al observador conocer el tamaño real de los objetos o
microorganismos que está observando a través del microscopio. Para estas mediciones
pueden utilizarse varios métodos.
microorganismos que está observando a través del microscopio. Para estas mediciones
pueden utilizarse varios métodos.
Método de los micrómetros. Se utiliza para esto un micrómetro de platina o de objetivo,
que consiste en un portaobjetos en cuyo centro se halla una escala graduada (de 2 mm. de
longitud), con separaciones, entre cada división, de una centésima de milímetro.
que consiste en un portaobjetos en cuyo centro se halla una escala graduada (de 2 mm. de
longitud), con separaciones, entre cada división, de una centésima de milímetro.
Además se utiliza un micrómetro ocular que lleva una escala graduada en décimas de
milímetros. Se coloca el micrómetro objetivo sobre la platina y se enfoca el microscopio
hasta que las líneas de la escala graduada aparezcan nítidas. Luego se hace superponer la
escala del ocular y se toma como referencia las primeras divisiones en que una línea del
micrómetro objetivo y una línea del micrómetro ocular coincidan o se superpongan
exactamente.
milímetros. Se coloca el micrómetro objetivo sobre la platina y se enfoca el microscopio
hasta que las líneas de la escala graduada aparezcan nítidas. Luego se hace superponer la
escala del ocular y se toma como referencia las primeras divisiones en que una línea del
micrómetro objetivo y una línea del micrómetro ocular coincidan o se superpongan
exactamente.
Luego, por simple regla de tres, se calcula el valor en mieras de cada división ocular.
Veamos un ejemplo. Si 9 divisiones del micrómetro objetivo (0,09mm) equivalen a 30
divisiones del micrómetro ocular, cada división del ocular equivaldrá a: 0,09 = 0,003 mm.
= 3 μm
Veamos un ejemplo. Si 9 divisiones del micrómetro objetivo (0,09mm) equivalen a 30
divisiones del micrómetro ocular, cada división del ocular equivaldrá a: 0,09 = 0,003 mm.
= 3 μm
Quiere decir que para el objetivo calibrado y el ocular utilizado, cada división del
micrómetro ocular equivale a 3 μm. Una vez obtenido este dato para cada objetivo en la
forma que hemos expuesto, teniendo el microscopio ocular podrían hacerse todas las
mediciones que se deseen. Para medir, por ejemplo, un Paramecium de una preparación,
procedemos así: haremos coincidir los extremos del microorganismo con las divisiones del
micrómetro ocular. Si la longitud del organismo es de 75 divisiones del micrómetro
ocular, y cada división equivale a 3 μm, la longitud del Paramecium será 75x3= 225 μm.
micrómetro ocular equivale a 3 μm. Una vez obtenido este dato para cada objetivo en la
forma que hemos expuesto, teniendo el microscopio ocular podrían hacerse todas las
mediciones que se deseen. Para medir, por ejemplo, un Paramecium de una preparación,
procedemos así: haremos coincidir los extremos del microorganismo con las divisiones del
micrómetro ocular. Si la longitud del organismo es de 75 divisiones del micrómetro
ocular, y cada división equivale a 3 μm, la longitud del Paramecium será 75x3= 225 μm.
También se pueden efectuar mediciones en el microscopio con cámara clara y utilizando
una regla. En realidad, estas medidas no son tan exactas como cuando se utilizan
micrómetros por errores que se introducen superponiendo imágenes.
una regla. En realidad, estas medidas no son tan exactas como cuando se utilizan
micrómetros por errores que se introducen superponiendo imágenes.
Mantenimiento del microscopio
El microscopio debe estar protegido del polvo, humedad y otros agentes que pudieran
dañarlo. Mientras no esté en uso debe guardarse en un estuche o gabinete, o bien cubrirlo
con una bolsa plástica o campana de vidrio.
dañarlo. Mientras no esté en uso debe guardarse en un estuche o gabinete, o bien cubrirlo
con una bolsa plástica o campana de vidrio.
Las partes mecánicas deben limpiarse con un paño suave; en algunos casos, éste se puede
humedecer con xilol para disolver ciertas manchas de grasa, aceite de cedro, parafina, etc.
Que hayan caído sobre las citadas partes.
La limpieza de las partes ópticas requiere precauciones especiales. Para ello debe
emplearse papel "limpiante" que expiden las casas distribuidoras de material de
laboratorio. Nunca deben tocarse las lentes del ocular, objetivo y condensador con los
dedos; las huellas digitales perjudican la visibilidad, y cuando se secan resulta trabajoso
eliminarlas.
Para una buena limpieza de las lentes puede humedecerse el papel "limpiante" con éter y
luego pasarlo por la superficie cuantas veces sea necesario. El aceite de cedro que queda
sobre la lente frontal del objetivo de inmersión debe quitarse inmediatamente después de
finalizada la observación. Para ello se puede pasar el papel "limpialentes" impregnado con
una gota de xilol. Para guardarlo se acostumbra colocar el objetivo de menor aumento
sobre la platina y bajado hasta el tope; el condensador debe estar en su posición más baja,
para evitar que tropiece con alguno de los objetivos. Guárdese en lugares secos, para evitar
que la humedad favorezca la formación de hongos. Ciertos ácidos y otras sustancias
químicas que producen emanaciones fuertes, deben mantenerse alejados del microscopio.
Conclusiones
El Microscopio es: cualquiera de los distintos tipos de instrumentos que se utilizan para
obtener una imagen aumentada de objetos minúsculos o detalles muy pequeños de los
mismos. El microscopio simple o lente de aumento es el más sencillo de todos y consiste
en realidad en una lupa que agranda la imagen del objeto observado. Las evidentes
limitaciones de este sistema, conocido desde la antigüedad, y el desarrollo de la óptica y
de la construcción de lentes hizo que surgieran en el siglo XVII los microscopios
compuestos, diestramente utilizados por el holandés Antonie van Leewenhock en el
estudio de la microfauna de los estanques y charlas. Estas observaciones, unidas a las de
Robert Hooke, establecieron la microscopia como poderosa herramienta científica.
Dos lentes convexas bastan para construir un microscopio. Cada lente hace converger los
rayos luminosos que la atraviesan. Una de ellas, llamada objetivo, se sitúa cerca del objeto
que se quiere estudiar. El objetivo forma una imagen real aumentada e invertida. Se dice
que la imagen es real porque los rayos luminosos pasan realmente por el lugar de la
imagen. La imagen es observada por la segunda lente, llamada ocular, que actúa
sencillamente como una lupa. El ocular está situado de modo que no forma una segunda
imagen real, sino que hace divergir los rayos luminosos, que al entrar en el ojo del
observador parecen proceder de una gran imagen invertida situada más allá del objetivo.
Como los rayos luminosos no pasan realmente por ese lugar, se dice que la imagen es
virtual.
Microscopio de luz Ultravioleta
Microscopio de luz ultravioleta – La imagen en el microscopio de luz ultravioleta
depende de la absorción de esa luz por las moléculas de la muestra. La fuente de luz
ultravioleta tiene una longitud de onda de 200 nm, por lo tanto puede alcanzar una
resolución de 100 nm. La microscopia ultravioleta no es muy diferente del funcionamiento
de un espectrofotómetro pero sus resultados son registrados en fotografías. La muestra no
se puede observar directamente a través del ocular porque la luz ultravioleta puede dañar
la retina. El método sirve para detectar ácidos nucleicos, proteínas que contienen
determinados aminoácidos. Mediante longitudes de ondas específicas para la iluminación
se puede obtener mediciones espectrofotométricas para cuantificar el DNA y el RNA de
cada célula.
depende de la absorción de esa luz por las moléculas de la muestra. La fuente de luz
ultravioleta tiene una longitud de onda de 200 nm, por lo tanto puede alcanzar una
resolución de 100 nm. La microscopia ultravioleta no es muy diferente del funcionamiento
de un espectrofotómetro pero sus resultados son registrados en fotografías. La muestra no
se puede observar directamente a través del ocular porque la luz ultravioleta puede dañar
la retina. El método sirve para detectar ácidos nucleicos, proteínas que contienen
determinados aminoácidos. Mediante longitudes de ondas específicas para la iluminación
se puede obtener mediciones espectrofotométricas para cuantificar el DNA y el RNA de
cada célula.
El microscopio de luz ultravioleta utiliza el rango ultravioleta del espectro luminoso en
lugar del rango visible, bien para aumentar la resolución con una longitud de onda menor
o para mejorar el detalle absorbiendo selectivamente distintas longitudes de onda de la
banda ultravioleta. Dado que el vidrio no transmite las longitudes de onda más cortas de la
luz ultravioleta, los elementos ópticos de estos microscopios están hechos con cuarzo,
fluorita o sistemas de espejos aluminizados. Además, dado que la radiación ultravioleta es
invisible, la imagen se muestra con fosforescencia (véase Luminiscencia ), en fotografía o
con un escáner electrónico. El microscopio de luz ultravioleta se utiliza en la investigación
científica.
lugar del rango visible, bien para aumentar la resolución con una longitud de onda menor
o para mejorar el detalle absorbiendo selectivamente distintas longitudes de onda de la
banda ultravioleta. Dado que el vidrio no transmite las longitudes de onda más cortas de la
luz ultravioleta, los elementos ópticos de estos microscopios están hechos con cuarzo,
fluorita o sistemas de espejos aluminizados. Además, dado que la radiación ultravioleta es
invisible, la imagen se muestra con fosforescencia (véase Luminiscencia ), en fotografía o
con un escáner electrónico. El microscopio de luz ultravioleta se utiliza en la investigación
científica.
Microscopio de Flourescencia
El microscopio de fluorescencia es una variación del microscopio de luz ultravioleta en
el que los objetos son iluminados por rayos de una determinada longitud de onda . La
imagen observada es el resultado de la radiación electromagnética emitida por las
moléculas que han absorbido la excitación primaria y reemitido una luz con mayor
longitud de onda. Para dejar pasar sólo la emisión secundaria deseada, se deben colocar
filtros apropiados debajo del condensador y encima del objetivo. Se usa para detectar
sustancias con autofluorescencia ( vitamina A ) o sustancias marcadas con fluorocromos.
el que los objetos son iluminados por rayos de una determinada longitud de onda . La
imagen observada es el resultado de la radiación electromagnética emitida por las
moléculas que han absorbido la excitación primaria y reemitido una luz con mayor
longitud de onda. Para dejar pasar sólo la emisión secundaria deseada, se deben colocar
filtros apropiados debajo del condensador y encima del objetivo. Se usa para detectar
sustancias con autofluorescencia ( vitamina A ) o sustancias marcadas con fluorocromos.
El microscopio de fluorescencia Olympus BX61, acoplado con una cámara digital .
Microscopio de campo oscuro
El microscopio de campo oscuro utiliza un haz enfocado de luz muy intensa en forma de
un cono hueco concentrado sobre el espécimen. El objeto iluminado dipersa la luz y se
hace así visible contra el fondo oscuro que tiene detrás, como las partículas de polvo
iluminadas por un rayo de sol que se cuela en una habitación cerrada. Por ello las
porciones transparentes del espécimen quedan oscuras, mientras que las superficies y
partículas se ven brillantes, por la luz que reciben y dispersan en todas las direcciones,
incluida la del eje óptico que conecta el espécimen con la pupila del observador. Esta
forma de iluminación se utiliza para analizar elementos biológicos transparentes y sin
pigmentar, invisibles con iluminación normal, sin fijar la muestra, es decir, sin matarla.
un cono hueco concentrado sobre el espécimen. El objeto iluminado dipersa la luz y se
hace así visible contra el fondo oscuro que tiene detrás, como las partículas de polvo
iluminadas por un rayo de sol que se cuela en una habitación cerrada. Por ello las
porciones transparentes del espécimen quedan oscuras, mientras que las superficies y
partículas se ven brillantes, por la luz que reciben y dispersan en todas las direcciones,
incluida la del eje óptico que conecta el espécimen con la pupila del observador. Esta
forma de iluminación se utiliza para analizar elementos biológicos transparentes y sin
pigmentar, invisibles con iluminación normal, sin fijar la muestra, es decir, sin matarla.
También es bastante utilizado en la observación de muestras metalográficas para la
observación de detalles en superficies con alta reflectancia.
observación de detalles en superficies con alta reflectancia.
El objetivo recibe la luz dispersa o refractada por las estructuras del espécimen. Para
lograrlo, el microscopio de campo oscuro está equipado con un condensador especial que
ilumina la muestra con luz fuerte indirecta. En consecuencia el campo visual se observa
detrás de la muestra como un fondo oscuro sobre el cual aparecen pequeñas partículas
brillantes de la muestra que reflejan parte de la luz hacia el objetivo.
lograrlo, el microscopio de campo oscuro está equipado con un condensador especial que
ilumina la muestra con luz fuerte indirecta. En consecuencia el campo visual se observa
detrás de la muestra como un fondo oscuro sobre el cual aparecen pequeñas partículas
brillantes de la muestra que reflejan parte de la luz hacia el objetivo.
El efecto es similar a las partículas de polvo que se ven en el haz de luz emanado de un
proyector de diapositivas en una habitación oscura. La luz reflejada por las partículas de
polvo llegan hasta la retina del ojo, lo que las hace visibles. La luz dispersa permite
incluso distinguir partículas más pequeñas que el poder separador del sistema óptico usado
por transparencia.
Ammonia tepida , un foraminífero, en microscopía de fondo oscuro. Los tenues
seudópodos se ven claros, por la luz que dispersan, contra el fondo oscuro
Microscopio de contraste de fase
proyector de diapositivas en una habitación oscura. La luz reflejada por las partículas de
polvo llegan hasta la retina del ojo, lo que las hace visibles. La luz dispersa permite
incluso distinguir partículas más pequeñas que el poder separador del sistema óptico usado
por transparencia.
Ammonia tepida , un foraminífero, en microscopía de fondo oscuro. Los tenues
seudópodos se ven claros, por la luz que dispersan, contra el fondo oscuro
Microscopio de contraste de fase
Microscopio de fase , se utiliza cuando se necesitan ver objetos incoloros. Si la amplitud
de la luz que incide apenas cambia, se obtiene un contraste muy malo. Se usa entonces una
iluminación por varios sitios y se miden diferencias de fase para poder "ver" el objeto.
Contraste de Fases
Una muestra microscópica normalmente se visualiza porque su densidad varía de unas
zonas a otras. Es muy difícil ver detalles de una muestra completamente transparente con
iluminación de campo claro, ya que todas las zonas son de la misma densidad. Sin
embargo, no todas tienen el mismo índice de refracción. El índice de refracción provoca
alteraciones en la fase de la onda.
SISTEMA: se coloca en el plano focal del condensador un diafragma anular que proyecta
en el infinito la imagen de un haz anular. En el plano focal del objetivo se coloca una
lamina que contiene un anillo, llamado anillo de fase, construido de forma que la luz que
pase a través de el ( la luz no difractada ) sufra una disminución en intensidad y un
desplazamiento de fase de un cuarto de longitud de onda en relación con la luz difractada.
El efecto final simula una imagen de una muestra que tuviera variaciones de densidad en
lugar de variaciones de índice de refracción.
lugar de variaciones de índice de refracción.
El contraste de fases suele utilizarse mucho para estudiar muestras transparentes vivas.
Clases de microscopios
Existen diversas clases de microscopios, según la naturaleza de los sistemas de luz, y otros
accesorios utilizados para obtener las imágenes.
accesorios utilizados para obtener las imágenes.
El microscopio compuesto u óptico utiliza lentes para ampliar las imágenes de los objetos observados. El aumento obtenido con estos microscopios es reducido, debido a la longitud de onda de la luz visible que impone limitaciones. El microscopio óptico puede ser monocular, y consta de un solo tubo. La observación en estos casos se hace con un solo ojo. Es binocular cuando posee dos tubos. La observación se hace con los dos ojos. Esto presenta ventajas tales como mejor percepción de la imagen, más cómoda la observación y se perciben con mayor nitidez los detalles.
Microscopio estereoscópico: el microscopio estereoscópico hace posible la visión tridimensional de los objetos. Consta de dos tubos oculares y dos objetivos pares para cada aumento. Este microscopio ofrece ventajas para observaciones que requieren pequeños aumentos. El óptimo de visión estereoscópica se encuentra entre 2 y 40X o aumento total del microscopio.
Microscopio de campo oscuro. Este microscopio está provisto de un condensador paraboloide, que hace que los rayos luminosos no penetren directamente en el objetivo, sino que iluminan oblicuamente la preparación. Los objetos aparecen como puntos luminosos sobre un fondo oscuro.
Microscopio de fluorescencia. La fluorescencia es la propiedad que tienen algunas sustancias de emitir luz propia cuando inciden sobre ellas radiaciones energéticas. El tratamiento del material biológico con flurocromos facilita la observación al microscopio.
Microscopio de contraste de fases. Se basa en las modificaciones de la trayectoria de los
rayos de luz, los cuales producen contrastes notables en la preparación.
El microscopio
rayos de luz, los cuales producen contrastes notables en la preparación.
El microscopio
Tipos de Microscopios
Tipos de microscopios
• Contenido disponible bajo los términos de la Licencia de documentación libre de
GNU
Microscopio óptico
• Contenido disponible bajo los términos de la Licencia de documentación libre de
GNU
Microscopio óptico
Un microscopio óptico es un microscopio basado en lentes ópticas . El desarrollo de este
aparato suele asociarse con los trabajos de Anton van Leeuwenhoek . Los microscopios de
Leeuwenhoek constaban de una única lente pequeña y convexa , montada sobre una
plancha, con un mecanismo para sujetar el material que se iba a examinar (la muestra o
espécimen). Este uso de una única lente convexa se conoce como microscopio simple , en
el que se incluye la lupa , entre otros aparatos ópticos.
aparato suele asociarse con los trabajos de Anton van Leeuwenhoek . Los microscopios de
Leeuwenhoek constaban de una única lente pequeña y convexa , montada sobre una
plancha, con un mecanismo para sujetar el material que se iba a examinar (la muestra o
espécimen). Este uso de una única lente convexa se conoce como microscopio simple , en
el que se incluye la lupa , entre otros aparatos ópticos.
Historia del Microscopio óptico (M.O.)
• 1608 Z. Jansen construye un microscopio con dos lentes convergentes.
• 1611 Kepler sugiere la manera de fabricar un microscopio compuesto.
• 1665 Hooke utiliza un microscopio compuesto para estudiar cortes de corcho y
describe los pequeños poros en forma de caja a los que él llamó "células". Publica
su libro Micrographia
• 1674 Leeuwenhoek informa su descubrimiento de protozoarios. Observará
bacterias por primera vez 9 años después.
• 1828 W. Nicol desarrolla la microscopía con luz polarizada.
• 1849 J. Quekett publica un tratado práctico sobre el uso del microscopio.
• 1838 Schleiden y Schwann proponen la teoría de la célula y declaran que la célula
nucleada es la unidad estructural y funcional en plantas y animales.
• 1876 Abbé analiza los efectos de la difracción en la formación de la imagen en el
microscopio y muestra cómo perfeccionar el diseño del microscopio.
• 1881 Retzius describe gran número de tejidos animales con un detalle que no ha
sido superado por ningún otro microscopista de luz. En las siguientes dos décadas
él, Cajal y otros histólogos desarrollan nuevos métodos de tinción y ponen los
fundamentos de la anatomía microscópica.
• 1886 Zeiss fabrica una serie de lentes, diseño de Abbé que permiten al
microscopista resolver estructuras en los límites teóricos de la luz visible.
• 1908 Köhler y Siedentopf desarrollan el microscopio de fluorescencia.
• 1930 Lebedeff diseña y construye el primer microscopio de interferencia.
• 1932 Zernike inventa el microscopio de contraste de fases.
• 1937 Ernst Ruska y Max Knoll, físicos alemanes, construyen el primer
microscopio electrónico.
• 1952 Nomarski inventa y patenta el sistema de contraste de interferencia
diferencial para el microscopio de luz.
• 1981 Aparece el microscopio de efecto túnel (MET).
Funcion del microscopio óptico
Las células son las unidades básicas de los seres vivos. La mayoría de ellas son de
pequeño tamaño por lo que es indispensable el uso de instrumentos como los microscopios
para su visualización. La exigencia del estudio de las estructuras celulares ha llevado a la
invencion y mejoramiento practico de esta herramienta muy utilizada en las disciplinas de
la biologia y la medicina incorporandose ahora en las ciencias exactas para la
caracterizacion de muestras quimicas. En la tabla siguiente se muestra el rango de
resolucion comparados con otras tecnicas.
pequeño tamaño por lo que es indispensable el uso de instrumentos como los microscopios
para su visualización. La exigencia del estudio de las estructuras celulares ha llevado a la
invencion y mejoramiento practico de esta herramienta muy utilizada en las disciplinas de
la biologia y la medicina incorporandose ahora en las ciencias exactas para la
caracterizacion de muestras quimicas. En la tabla siguiente se muestra el rango de
resolucion comparados con otras tecnicas.
Partes del microscopio óptico y sus funciones
• Ocular: lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del objetivo.
• Objetivo: lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta.
• Condensador: lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación.
• Diafragma: regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
• Foco: dirige los rayos luminosos hacia el condensador.
• Cuerpo.
• Fase Mecánica.
• Control de la fase mecánica.
• Control de enfoque
• Lente ocular: su función es la de captar y ampliar la imagen formada en los
objetos.
• Tubo: es una càmara oscura unida al brazo mediante una cremallera.
• Revólver: Es un sistema que coge los objetivos, y que rueda para utilizar un
objetivo u otro.
• Tornillos macro y micrométrico: Son tornillos de enfoque, mueven la platina hacia
arriba y hacia abajo. El macrométrico lo hace de forma rápida y el micrométrico de
forma lenta. Llevan incorporado un mando de bloqueo que fija la platina a una
determinada altura.
• Platina: Es una plataforma horizontal con un orificio central, sobre el que se coloca
la preparación, que permite el paso de los rayos procedentes de la fuente de
iluminación situada por debajo. Dos pinzas sirven para retener el portaobjetos
sobre la platina y un sistema de cremallera guiado por dos tornillos de
desplazamiento permite mover la preparación de delante hacia atrás o de izquierda
a derecha y viceversa. En la parte posterior de uno de los laterales se encuentra un
nonius que permite fijar las coordenadas de cualquier campo óptico; de esta forma
se puede acudir a el cuando interesa.
estas son la partes del microcospio.
• Ocular: lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del objetivo.
• Objetivo: lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta.
• Condensador: lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación.
• Diafragma: regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
• Foco: dirige los rayos luminosos hacia el condensador.
• Cuerpo.
• Fase Mecánica.
• Control de la fase mecánica.
• Control de enfoque
• Lente ocular: su función es la de captar y ampliar la imagen formada en los
objetos.
• Tubo: es una càmara oscura unida al brazo mediante una cremallera.
• Revólver: Es un sistema que coge los objetivos, y que rueda para utilizar un
objetivo u otro.
• Tornillos macro y micrométrico: Son tornillos de enfoque, mueven la platina hacia
arriba y hacia abajo. El macrométrico lo hace de forma rápida y el micrométrico de
forma lenta. Llevan incorporado un mando de bloqueo que fija la platina a una
determinada altura.
• Platina: Es una plataforma horizontal con un orificio central, sobre el que se coloca
la preparación, que permite el paso de los rayos procedentes de la fuente de
iluminación situada por debajo. Dos pinzas sirven para retener el portaobjetos
sobre la platina y un sistema de cremallera guiado por dos tornillos de
desplazamiento permite mover la preparación de delante hacia atrás o de izquierda
a derecha y viceversa. En la parte posterior de uno de los laterales se encuentra un
nonius que permite fijar las coordenadas de cualquier campo óptico; de esta forma
se puede acudir a el cuando interesa.
estas son la partes del microcospio.
Sistema de iluminación
La fuente de luz 1, con l ayuda de una lente (o sistema) 2, llamada colector, se representa
en el plano del diafragma iris de abertura 5 del condensador 6. Este diagrama se instala en
el plano focal anterior del condensador 6 y puede variar su abertura numérica. El diagrama
iris 3 dispuesto junto al colector 2 es el diafragma de campo. La variación del diámetro del
diafragma de campo permite obtener su imagen igual al campo visual lineal del
microscopio. La abertura numérica del condensador 6 supera, generalmente la de la
abertura del objetivo microscópico.
en el plano del diafragma iris de abertura 5 del condensador 6. Este diagrama se instala en
el plano focal anterior del condensador 6 y puede variar su abertura numérica. El diagrama
iris 3 dispuesto junto al colector 2 es el diafragma de campo. La variación del diámetro del
diafragma de campo permite obtener su imagen igual al campo visual lineal del
microscopio. La abertura numérica del condensador 6 supera, generalmente la de la
abertura del objetivo microscópico.
El microscopio compuesto
El diagrama siguiente muestra un microscopio compuesto. En su forma más simple, como
la que utilizó Robert Hooke , tiene una sola lente de cristal de distancia focal corta para el
objetivo, y otra única lente de cristal para el ocular .
Principales elementos de un microscopio básico
la que utilizó Robert Hooke , tiene una sola lente de cristal de distancia focal corta para el
objetivo, y otra única lente de cristal para el ocular .
Principales elementos de un microscopio básico
Los microscopios de este tipo suelen ser más complejos, con varias lentes en el objetivo
como en el ocular. El objetivo de éstas lentes es el de reducir la aberración cromática y la
aberración esférica . En los microscopios modernos el espejo se sustituye por una lámpara
que ofrece una iluminación estable y controlable.
como en el ocular. El objetivo de éstas lentes es el de reducir la aberración cromática y la
aberración esférica . En los microscopios modernos el espejo se sustituye por una lámpara
que ofrece una iluminación estable y controlable.
Los microscopios compuestos se utilizan para estudiar especímenes delgados, puesto que
su profundidad de campo es muy limitada. Por lo general, se utilizan para examinar
cultivos, preparaciones trituradas o una lámina muy fina del material que sea.
su profundidad de campo es muy limitada. Por lo general, se utilizan para examinar
cultivos, preparaciones trituradas o una lámina muy fina del material que sea.
Normalmente depende de la luz que atraviese la muestra desde abajo y usualmente son
necesarias técnicas especiales para aumentar el contraste de la imagen .
La resolución de los microscopios ópticos está restringida por un fenómeno llamado
difracción que, dependiendo de la apertura numérica (AN o A N ) del sistema óptico y la
longitud de onda de la luz utilizada ( ? ), establece un límite definido ( d ) a la resolución
óptica . Suponiendo que las aberraciones ópticas fueran despreciables, la resolución sería:
necesarias técnicas especiales para aumentar el contraste de la imagen .
La resolución de los microscopios ópticos está restringida por un fenómeno llamado
difracción que, dependiendo de la apertura numérica (AN o A N ) del sistema óptico y la
longitud de onda de la luz utilizada ( ? ), establece un límite definido ( d ) a la resolución
óptica . Suponiendo que las aberraciones ópticas fueran despreciables, la resolución sería:
Normalmente, se supone una ? de 550 nm , correspondiente a la luz verde . Si el medio es
el aire , la A N práctica máxima es de 0,95, y en el caso de aceite de hasta 1,5.
Ello implica que incluso el mejor microscopio óptico está limitado a una resolución de
unos 0,2 micrómetros .
el aire , la A N práctica máxima es de 0,95, y en el caso de aceite de hasta 1,5.
Ello implica que incluso el mejor microscopio óptico está limitado a una resolución de
unos 0,2 micrómetros .
Poder separador, objetivos de inmersión y aumento útil.
Poder separador De la teoría de la difracción sobre la formación de imágenes mediante
un microscopio se tiene que la distancia mínima entre dos puntos visibles por separado es:
Donde ? es la longitud de onda de la luz monocromática en la que se observa el objeto y A
es la abertura del microscopio.
Poder separador De la teoría de la difracción sobre la formación de imágenes mediante
un microscopio se tiene que la distancia mínima entre dos puntos visibles por separado es:
Donde ? es la longitud de onda de la luz monocromática en la que se observa el objeto y A
es la abertura del microscopio.
Objetivos de inmersión: El medio óptico líquido que rellena el espacio entre el objeto y
el objetivo se le denomina líquido de inmersión. El índice de refracción de este es próximo
al del vidrio (se utiliza agua, glicerina, aceites cedral y de enebro, monobromonaftalina,
etc.) En la figura se muestra el papel del líquido:
el objetivo se le denomina líquido de inmersión. El índice de refracción de este es próximo
al del vidrio (se utiliza agua, glicerina, aceites cedral y de enebro, monobromonaftalina,
etc.) En la figura se muestra el papel del líquido:
Correcciones
Tipos de objetivos y sus características.
Aunque todos los componentes que constituyen un microscopio son importantes, los
objetivos son de suma importancia, puesto que la imagen, en definitiva, depende en gran
medida de su calidad. Los mejores objetivos son aquellos que están corregidos para las
aberraciones
Aunque todos los componentes que constituyen un microscopio son importantes, los
objetivos son de suma importancia, puesto que la imagen, en definitiva, depende en gran
medida de su calidad. Los mejores objetivos son aquellos que están corregidos para las
aberraciones
¿Qué son las aberraciones?
Las aberraciones son alteraciones ópticas en la formación de la imagen debidas a las
propias lentes del objetivo.
• aberraciones geométricas
• aberraciones cromáticas
propias lentes del objetivo.
• aberraciones geométricas
• aberraciones cromáticas
¿Cómo se corrigen las aberraciones?
Para evitar las aberraciones geométricas se construyen los llamados objetivos planos o
planáticos, lo cual suele estar indicado en el propio objetivo con la inscripción PLAN. Los
objetivos que están corregidos para las aberraciones cromáticas se denominan acromáticos
(corregidos para el rojo y el azul), semiapocromáticos (corregidos para el rojo y el azul y
tienen una mayor apertura numérica) y finalmente los apocromáticos (que son de mayor
calidad y están corregidos para el rojo, el azul y el verde).
¿Qué indican las diferentes inscripciones que pueden
leerse en un objetivo?
planáticos, lo cual suele estar indicado en el propio objetivo con la inscripción PLAN. Los
objetivos que están corregidos para las aberraciones cromáticas se denominan acromáticos
(corregidos para el rojo y el azul), semiapocromáticos (corregidos para el rojo y el azul y
tienen una mayor apertura numérica) y finalmente los apocromáticos (que son de mayor
calidad y están corregidos para el rojo, el azul y el verde).
¿Qué indican las diferentes inscripciones que pueden
leerse en un objetivo?
En un objetivo deben venir especificadas una serie de datos que hacen referencia a sus
características:
características:
• Fabricante/País. Por ejemplo: Zeiss/West Germany
• Numero de serie.
• Tipo y corrección. Si no llevan ninguna especificación es que se trata de objetivos
acromáticos. Denominaciones frecuentes que * pueden encontrarse son:
acromáticos. Denominaciones frecuentes que * pueden encontrarse son:
• PLAN = objetivo planacromático;
• NEOFLUAR = objetivo con apertura numérica incrementada;
• PLANAPO = objetivo planapocromático;
• ULTRAFLUAR = objetivo especial para fluorescencia;
• POL = objetivo exento de tensiones, especial para microscopía de polarización;
• Ph 2 = objetivo de contraste de fases con anillo del número 2;
• m.J = objetivo con diafragma iris, apropiado para campo oscuro.
• Aumentos y Apertura Numérica. Por ejemplo: 25/0,8 indica un objetivo con una
potencia de 25 aumentos y una apertura numérica de 0,8
• NEOFLUAR = objetivo con apertura numérica incrementada;
• PLANAPO = objetivo planapocromático;
• ULTRAFLUAR = objetivo especial para fluorescencia;
• POL = objetivo exento de tensiones, especial para microscopía de polarización;
• Ph 2 = objetivo de contraste de fases con anillo del número 2;
• m.J = objetivo con diafragma iris, apropiado para campo oscuro.
• Aumentos y Apertura Numérica. Por ejemplo: 25/0,8 indica un objetivo con una
potencia de 25 aumentos y una apertura numérica de 0,8
• Longitud de tubo/cubre-objetos. Por ejemplo: 170/0,17 indica que es un objetivo
para un microscopio de tubo de 17 cm. y que está *corregido para ser utilizado con
cubre-objetos de un grosor de 0,17 mm.
para un microscopio de tubo de 17 cm. y que está *corregido para ser utilizado con
cubre-objetos de un grosor de 0,17 mm.
• La especificación 170/0 indica que está corregido para poder observar
preparaciones sin cubrir. Cuando se encuentra la inscripción Korr se indica que el
objetivo puede regularse para diferentes grosores de cubreobjetos.
preparaciones sin cubrir. Cuando se encuentra la inscripción Korr se indica que el
objetivo puede regularse para diferentes grosores de cubreobjetos.
• Inmersión. La especificación Oil indica que se trata de un objetivo que debe
utilizarse con aceite de inmersión; W = Inmersión en agua; Glyc: Inmersión en
glicerina.
utilizarse con aceite de inmersión; W = Inmersión en agua; Glyc: Inmersión en
glicerina.
Bases de datos y Referencias:
• Nikon MicroscopyU Microscope Optical Systems [3]
• El Microscopio Optico pg. AngleFire [4]
• Monografias [5]
Muestran una variedad de tamaños obtenidos, mejorando la microscopia Óptica.
Aplicaciones del Microscopio Óptico
• Nikon MicroscopyU Microscope Optical Systems [3]
• El Microscopio Optico pg. AngleFire [4]
• Monografias [5]
Muestran una variedad de tamaños obtenidos, mejorando la microscopia Óptica.
Aplicaciones del Microscopio Óptico
Este instrumento ha sido de gran utilidad, sobre todo en los campos de la ciencia en donde
la estructura y la organización microscópica es importante, incorporándose con éxito a
investigaciones dentro del área de la Química en el estudio de cristales, la Física en la
investigación de las propiedades físicas de los materiales, la Geología en el análisis de la
composición mineralógica de algunas rocas y por supuesto en el campo de la Biología, en
el estudio de estructuras microscópicas de la materia viva, por citar algunas disciplinas de
la ciencia.
la estructura y la organización microscópica es importante, incorporándose con éxito a
investigaciones dentro del área de la Química en el estudio de cristales, la Física en la
investigación de las propiedades físicas de los materiales, la Geología en el análisis de la
composición mineralógica de algunas rocas y por supuesto en el campo de la Biología, en
el estudio de estructuras microscópicas de la materia viva, por citar algunas disciplinas de
la ciencia.
Hasta ahora se da uso en laboratorio de histología y anatomía patológica, la microscopía
permite determinadas aplicaciones diagnósticas. Numerosas estructuras cristalinas,
pigmentos, lípidos, proteínas, depósitos óseos, depósitos de amiloide etc.
permite determinadas aplicaciones diagnósticas. Numerosas estructuras cristalinas,
pigmentos, lípidos, proteínas, depósitos óseos, depósitos de amiloide etc.
Microscopio estereoscópico
El diseño de este instrumento es distinto al del diagrama de más arriba y su utilidad es
diferente, pues se utiliza para ofrecer una imagen estereoscópica (3D) de la muestra. Para
ello, y como ocurre en la visión binocular convencional, es necesario que los dos ojos
observen la imagen con ángulos ligeramente distintos. Obviamente todos los microscopios
estereoscópicos, por definición, deben ser binoculares (con un ocular para cada ojo), por lo
que a veces se confunden ambos términos. Existen dos tipos de diseño, denominados
respectivamente convergente (o Greenough) y de objetivo común (o Galileo).
diferente, pues se utiliza para ofrecer una imagen estereoscópica (3D) de la muestra. Para
ello, y como ocurre en la visión binocular convencional, es necesario que los dos ojos
observen la imagen con ángulos ligeramente distintos. Obviamente todos los microscopios
estereoscópicos, por definición, deben ser binoculares (con un ocular para cada ojo), por lo
que a veces se confunden ambos términos. Existen dos tipos de diseño, denominados
respectivamente convergente (o Greenough) y de objetivo común (o Galileo).
El diseño convergente consiste en usar dos microscopios idénticos inclinados un cierto
ángulo uno con respecto a otro y acoplados mecánicamente de tal forma que enfocan la
imagen en el mismo punto y con el mismo aumento. Aunque es un diseño económico,
potente y en el que las aberraciones resultan muy fáciles de corregir, presenta algunas
limitaciones en cuanto a modularidad (capacidad de modificar el sistema para poner
accesorios) y la observación durante tiempos largos resulta fatigosa.
ángulo uno con respecto a otro y acoplados mecánicamente de tal forma que enfocan la
imagen en el mismo punto y con el mismo aumento. Aunque es un diseño económico,
potente y en el que las aberraciones resultan muy fáciles de corregir, presenta algunas
limitaciones en cuanto a modularidad (capacidad de modificar el sistema para poner
accesorios) y la observación durante tiempos largos resulta fatigosa.
El microscopio estereoscópico es apropiado para observar objetos de tamaños
relativamente grandes, por lo que no es necesario modificar los objetos a ver, (laminar) ni
tampoco lo es que la luz pase a través de la muestra. Este tipo de microscopios permite
una distancias que van desde un par de centímetros a las decenas de ellos desde la muestra
al objetivo, lo que lo hace muy útil en botánica, mineralogía y en la industria
(microelectrónica, por ejemplo) como en medicina (microscopios quirúrgicos) e
investigación, fundamentalmente en aplicaciones que requieren manipular el objeto
visualizado (donde la visión estereoscópica es esencial). En la fotografía se aprecia una
concha de 4 cm de diámetro.
relativamente grandes, por lo que no es necesario modificar los objetos a ver, (laminar) ni
tampoco lo es que la luz pase a través de la muestra. Este tipo de microscopios permite
una distancias que van desde un par de centímetros a las decenas de ellos desde la muestra
al objetivo, lo que lo hace muy útil en botánica, mineralogía y en la industria
(microelectrónica, por ejemplo) como en medicina (microscopios quirúrgicos) e
investigación, fundamentalmente en aplicaciones que requieren manipular el objeto
visualizado (donde la visión estereoscópica es esencial). En la fotografía se aprecia una
concha de 4 cm de diámetro.
Conectar una cámara digital a un microscopio óptico
Adaptador digital LM para la Canon EOS 5D
Adaptador digital LM para la Canon EOS 5D
Un adaptador óptico mecánico es importante en fotografía digital. Dicho adaptador sirve
de enlace entre la cámara y el microscopio. Es especialmente importante que la conexión
mecánica sea firme, pues cualquier movimiento mínimo, es decir, vibraciones de la
cámara, reduciría la calidad de la imagen notablemente. Adicionalmente, se requiere un
adaptador óptico para el trayecto de luz con el que se logrará así, que el sensor
CCD/CMOS de la cámara proyecte una imagen de total nitidez e iluminación.
de enlace entre la cámara y el microscopio. Es especialmente importante que la conexión
mecánica sea firme, pues cualquier movimiento mínimo, es decir, vibraciones de la
cámara, reduciría la calidad de la imagen notablemente. Adicionalmente, se requiere un
adaptador óptico para el trayecto de luz con el que se logrará así, que el sensor
CCD/CMOS de la cámara proyecte una imagen de total nitidez e iluminación.
La fotomicrografía (fotografía realizada con la ayuda de un microscopio compuesto) es un
campo muy especializado de la fotografía, para la que hay disponibles equipos de precio
muy elevado, y simples equipos de estudio.
campo muy especializado de la fotografía, para la que hay disponibles equipos de precio
muy elevado, y simples equipos de estudio.
Con un microscopio de calidad adecuada, como los que se encuentran en la mayoría de
loslaboratorios científicos, se pueden realizar fotomicrografías de una calidad razonable,
utilizando una cámara de uso general, de objetivo fijo o intercambiable.
loslaboratorios científicos, se pueden realizar fotomicrografías de una calidad razonable,
utilizando una cámara de uso general, de objetivo fijo o intercambiable.
Hay dos métodos básicos de tomar fotografías por medio del microscopio. En el primer
método el objetivo de la cámara realiza una función parecida a la del cristalino del ojo y
proyecta sobre el sensor una imagen real de la imagen virtual que se ve por el ocular del
microscopio. Este método es el único adecuado para utilización de cámaras con objetivo
fijo, esto es, no intercambiable. El segundo método, adecuado para cámaras con objetivo
intercambiable, implica retirar el objetivo de la cámara y ajustar el microscopio de modo
que el ocular forme una imagen directamente sobre el censor.
método el objetivo de la cámara realiza una función parecida a la del cristalino del ojo y
proyecta sobre el sensor una imagen real de la imagen virtual que se ve por el ocular del
microscopio. Este método es el único adecuado para utilización de cámaras con objetivo
fijo, esto es, no intercambiable. El segundo método, adecuado para cámaras con objetivo
intercambiable, implica retirar el objetivo de la cámara y ajustar el microscopio de modo
que el ocular forme una imagen directamente sobre el censor.
La calidad de la óptica de un microscopio (objetivo y ocular) es fundamental en la
determinación de la calidad de una imagen fotográfica. Los objetivos y oculares de
microscopio se encuentran en diferentes calidades, determinadas por la precisión con que
han sido corregidos de aberraciones. Los objetivos más económicos están corregidos de
aberración esférica para un solo color, generalmente el amarillo verdoso, pero no de
aberración cromática para la totalidad del espectro visible, sino sólo para dos o tres
colores, primarios. Estos objetivos se llaman acromáticos, y también muestran cierta
cantidad de curvatura de campo; esto es, que la totalidad del campo de visión del objetivo
no puede llevarse simultáneamente a foco fino.
determinación de la calidad de una imagen fotográfica. Los objetivos y oculares de
microscopio se encuentran en diferentes calidades, determinadas por la precisión con que
han sido corregidos de aberraciones. Los objetivos más económicos están corregidos de
aberración esférica para un solo color, generalmente el amarillo verdoso, pero no de
aberración cromática para la totalidad del espectro visible, sino sólo para dos o tres
colores, primarios. Estos objetivos se llaman acromáticos, y también muestran cierta
cantidad de curvatura de campo; esto es, que la totalidad del campo de visión del objetivo
no puede llevarse simultáneamente a foco fino.
Existen los acromáticos de campo plano, en los que la curvatura de campo ha sido casi
totalmente corregida, se denominan planacromáticos.
totalmente corregida, se denominan planacromáticos.
Los apocromáticos están corregidos de aberración esférica para dos colores y de
aberración cromática para los tres colores primarios. Aun así, mostrarán curvatura de
campo a menos que sean planapocromáticos, los mejores objetivos de que se dispone. Los
oculares también tienen diferentes calidades. Los más simples son los de campo ancho.
aberración cromática para los tres colores primarios. Aun así, mostrarán curvatura de
campo a menos que sean planapocromáticos, los mejores objetivos de que se dispone. Los
oculares también tienen diferentes calidades. Los más simples son los de campo ancho.
Los oculares compensadores se diseñan para compensar ciertas aberraciones cromáticas
residuales del objetivo, y dan su mejor resultado cuando se utilizan con objetivos
apocromáticos, aunque también pueden utilizarse con éxito con los acromáticos de mayor
potencia. Existen los oculares foto, especiales para fotomicrografía, y cuando se utilizan
con los objetivos planapocromáticos dan la mejor calidad posible de fotografía.
residuales del objetivo, y dan su mejor resultado cuando se utilizan con objetivos
apocromáticos, aunque también pueden utilizarse con éxito con los acromáticos de mayor
potencia. Existen los oculares foto, especiales para fotomicrografía, y cuando se utilizan
con los objetivos planapocromáticos dan la mejor calidad posible de fotografía.
Desor
El diseño de objetivo común utiliza dos rutas ópticas paralelas (una para cada ojo) que se
hacen converger en el mismo punto y con un cierto ángulo con un objetivo común a
ambos microscopios. El diseño es más sofisticado que el convergente, con mejor
modularidad y no genera fatiga en tiempos de observación largos. Sin embargo es más
costoso de fabricar y las aberraciones, al generarse la imagen a través de la periferia del
objetivo común y en un ángulo que no coincide con el eje óptico del mismo, son más
difíciles de corregir.
hacen converger en el mismo punto y con un cierto ángulo con un objetivo común a
ambos microscopios. El diseño es más sofisticado que el convergente, con mejor
modularidad y no genera fatiga en tiempos de observación largos. Sin embargo es más
costoso de fabricar y las aberraciones, al generarse la imagen a través de la periferia del
objetivo común y en un ángulo que no coincide con el eje óptico del mismo, son más
difíciles de corregir.
Los microscopios estereoscópicos suelen estar dotados, en cualquiera de sus variantes, de
un sistema pancrático (zoom) o un sistema de cambiador de aumentos que permite
observar la muestra en un rango de aumentos variable, siempre menor que el de un
microscopio compuesto.
un sistema pancrático (zoom) o un sistema de cambiador de aumentos que permite
observar la muestra en un rango de aumentos variable, siempre menor que el de un
microscopio compuesto.
Microscopio Simple
Un microscopio simple , al contrario que un microscopio óptico estándar, que tiene varias
lentes de aumento, es un microscopio que sólo utiliza una lente de aumento. El ejemplo
más clásico de microscopio simple es la lupa. Consiste en una sola lente, positiva.
lentes de aumento, es un microscopio que sólo utiliza una lente de aumento. El ejemplo
más clásico de microscopio simple es la lupa. Consiste en una sola lente, positiva.
El objeto por observar se coloca entre el foco y la superficie de la lente, lo que determina
la formación de una imagen virtual, derecha y cuanto mayor sea el poder dióptrico de la
lente y cuanto más alejado esté el punto próximo de la visión nítida del sujeto. por eso se
dice microscópio simple
la formación de una imagen virtual, derecha y cuanto mayor sea el poder dióptrico de la
lente y cuanto más alejado esté el punto próximo de la visión nítida del sujeto. por eso se
dice microscópio simple
El holandés Anton Van Leeuwenhoek construyó microscopios muy eficaces basados en
una sola lente, con los que pudo incluso describir por primera vez las bacterias.
Microscopio Compuesto
una sola lente, con los que pudo incluso describir por primera vez las bacterias.
Microscopio Compuesto
Un microscopio compuesto es un microscopio óptico que tiene más de un lente . Los
microscopios compuestos se utilizan especialmente para examinar objetos transparentes, o
cortados en láminas tan finas que se transparentan. Se emplea para aumentar o ampliar las
imágenes de objetos y organismos no visibles a simple vista. El microscopio óptico común
está conformado por tres sistemas:
microscopios compuestos se utilizan especialmente para examinar objetos transparentes, o
cortados en láminas tan finas que se transparentan. Se emplea para aumentar o ampliar las
imágenes de objetos y organismos no visibles a simple vista. El microscopio óptico común
está conformado por tres sistemas:
• El sistema mecánico está constituido por una serie de piezas en las que van
instaladas las lentes , que permiten el movimiento para el enfoque.
• El sistema óptico comprende un conjunto de lentes, dispuestas de tal manera que
producen el aumento de las imágenes que se observan a través de ellas.
instaladas las lentes , que permiten el movimiento para el enfoque.
• El sistema óptico comprende un conjunto de lentes, dispuestas de tal manera que
producen el aumento de las imágenes que se observan a través de ellas.
• El sistema de iluminación comprende las partes del microscopio que reflejan,
transmiten y regulan la cantidad de luz necesaria para efectuar la observación a
través del microscopio.
transmiten y regulan la cantidad de luz necesaria para efectuar la observación a
través del microscopio.
o 7.1 El microscopio electrónico
7.1.1 Invención del microscopio electrónico
7.1.2 Funcionamiento del microscopio electrónico
7.1.3 Microscopio electrónico de barrido
7.1.1 Invención del microscopio electrónico
7.1.2 Funcionamiento del microscopio electrónico
7.1.3 Microscopio electrónico de barrido
o 7.2 Microscopio quirúrgico
• 8 Medición a través del microscopio
• 9 Mantenimiento del microscopio
• 10 Conclusiones
• 11 Empresas y anuncios clasificados.
• 8 Medición a través del microscopio
• 9 Mantenimiento del microscopio
• 10 Conclusiones
• 11 Empresas y anuncios clasificados.
La parte mecánica del microscopio
La parte mecánica del microscopio comprende el pie, el tubo, el revólver, el asa, la platina,
el carro, el tornillo macrométrico y el tornillo micrométrico. Estos elementos sostienen la
parte óptica y de iluminación; además, permiten los desplazamientos necesarios para el
enfoque del objeto.
el carro, el tornillo macrométrico y el tornillo micrométrico. Estos elementos sostienen la
parte óptica y de iluminación; además, permiten los desplazamientos necesarios para el
enfoque del objeto.
• El pie. Constituye la base sobre la que se apoya el microscopio y tiene por lo
general forma de Y o bien es rectangular.
general forma de Y o bien es rectangular.
• El tubo. Tiene forma cilíndrica y está ennegrecido internamente para evitar las
molestias que ocasionan los reflejos de la luz. En su extremidad superior se
colocan los oculares.
molestias que ocasionan los reflejos de la luz. En su extremidad superior se
colocan los oculares.
• El revólver. Es una pieza giratoria provista de orificios en los que se enroscan los
objetivos. Al girar el revólver, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan
en posición de trabajo, lo que se nota por el ruido de un piñón que lo fija.
objetivos. Al girar el revólver, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan
en posición de trabajo, lo que se nota por el ruido de un piñón que lo fija.
• La columna, llamada también asa o brazo, es una pieza colocada en la parte
posterior del aparato. Sostiene el tubo en su porción superior y por el extremo
inferior se adapta al pie.
posterior del aparato. Sostiene el tubo en su porción superior y por el extremo
inferior se adapta al pie.
• La platina. Es una pieza metálica plana en la que se coloca la preparación u objeto
que se va a observar. Presenta un orificio, en el eje óptico del tubo, que permite el
paso de los rayos luminosos a la preparación. La platina puede ser fija, en cuyo
caso permanece inmóvil; en otros casos puede ser giratoria; es decir, mediante
tornillos laterales puede centrarse o producir movimientos circulares.
que se va a observar. Presenta un orificio, en el eje óptico del tubo, que permite el
paso de los rayos luminosos a la preparación. La platina puede ser fija, en cuyo
caso permanece inmóvil; en otros casos puede ser giratoria; es decir, mediante
tornillos laterales puede centrarse o producir movimientos circulares.
• Carro. Es un dispositivo, colocado sobre la platina, que permite deslizar la
preparación con movimiento ortogonal de adelante hacia atrás y de derecha a
izquierda.
preparación con movimiento ortogonal de adelante hacia atrás y de derecha a
izquierda.
• El tornillo macrométrico. Girando este tornillo, asciende o desciende el tubo del
microscopio, deslizándose en sentido vertical gracias a una cremallera. Estos
movimientos largos permiten el enfoque rápido de la preparación.
microscopio, deslizándose en sentido vertical gracias a una cremallera. Estos
movimientos largos permiten el enfoque rápido de la preparación.
• El tornillo micrométrico. Mediante el movimiento casi imperceptible que produce
al deslizar el tubo o la platina, se logra el enfoque exacto y nítido de la
preparación. Lleva acoplado un tambor graduado en divisiones de 0,001 mm., que
se utiliza para precisar sus movimientos y puede medir el espesor de los objetos.
al deslizar el tubo o la platina, se logra el enfoque exacto y nítido de la
preparación. Lleva acoplado un tambor graduado en divisiones de 0,001 mm., que
se utiliza para precisar sus movimientos y puede medir el espesor de los objetos.
Sistema óptico
El sistema óptico es el encargado de reproducir y aumentar las imágenes mediante el
conjunto de lentes que lo componen. Está formado por los oculares y los objetivos. El
objetivo proyecta una imagen de la muestra que el ocular luego amplía.
conjunto de lentes que lo componen. Está formado por los oculares y los objetivos. El
objetivo proyecta una imagen de la muestra que el ocular luego amplía.
• Los oculares: están constituidos generalmente por dos lentes, dispuestas sobre un
tubo corto. Los oculares más generalmente utilizados son los de: 8X, 10X, 12,5X,
15X. La X se utiliza para expresar en forma abreviada los aumentos.
tubo corto. Los oculares más generalmente utilizados son los de: 8X, 10X, 12,5X,
15X. La X se utiliza para expresar en forma abreviada los aumentos.
• Los objetivos: se disponen en una pieza giratoria denominada revólver y producen
el aumento de las imágenes de los objetos y organismos, y, por tanto, se hallan
cerca de la preparación que se examina. Los objetivos utilizados corrientemente
son de dos tipos: objetivos secos y objetivos de inmersión.
el aumento de las imágenes de los objetos y organismos, y, por tanto, se hallan
cerca de la preparación que se examina. Los objetivos utilizados corrientemente
son de dos tipos: objetivos secos y objetivos de inmersión.
o Los objetivos secos se utilizan sin necesidad de colocar sustancia alguna
entre ellos y la preparación. En la cara externa llevan una serie de índices
que indican el aumento que producen, la abertura numérica y otros datos.
entre ellos y la preparación. En la cara externa llevan una serie de índices
que indican el aumento que producen, la abertura numérica y otros datos.
Así, por ejemplo, si un objetivo tiene estos datos: plan 40/0,65 y 160/0,17,
significa que el objetivo es planacromático, su aumento 40 y su abertura
numérica 0,65, calculada para una longitud de tubo de 160 mm. El número
de objetivos varía con el tipo de microscopio y el uso a que se destina. Los
aumentos de los objetivos secos más frecuentemente utilizados son: 6X,
10X, 20X, 45X y 60X.
significa que el objetivo es planacromático, su aumento 40 y su abertura
numérica 0,65, calculada para una longitud de tubo de 160 mm. El número
de objetivos varía con el tipo de microscopio y el uso a que se destina. Los
aumentos de los objetivos secos más frecuentemente utilizados son: 6X,
10X, 20X, 45X y 60X.
o El objetivo de inmersión está compuesto por un complicado sistema de
lentes. Para observar a través de este objetivo es necesario colocar una gota
de aceite de cedro entre el objetivo y la preparación, de manera que la lente
frontal entre en contacto con el aceite de cedro. Generalmente, estos
objetivos son de 100X y se distingue por uno o dos círculos o anillos de
color negro que rodea su extremo inferior.
lentes. Para observar a través de este objetivo es necesario colocar una gota
de aceite de cedro entre el objetivo y la preparación, de manera que la lente
frontal entre en contacto con el aceite de cedro. Generalmente, estos
objetivos son de 100X y se distingue por uno o dos círculos o anillos de
color negro que rodea su extremo inferior.
Sistema de iluminación
Este sistema tiene como finalidad dirigir la luz natural o artificial de tal manera que
ilumine la preparación u objeto que se va a observar en el microscopio de la manera
adecuada. Comprende los siguientes elementos:
ilumine la preparación u objeto que se va a observar en el microscopio de la manera
adecuada. Comprende los siguientes elementos:
• Fuente de iluminación. Se trata generalmente de una lámpara incandescente de
tungsteno sobrevoltada. Por delante de ella se sitúa un condensador (una lente
convergente) e, idealmente, un diafragma de campo, que permite controlar el
diámetro de la parte de la preparación que queda iluminada, para evitar que exceda
el campo de observación produciendo luces parásitas.
tungsteno sobrevoltada. Por delante de ella se sitúa un condensador (una lente
convergente) e, idealmente, un diafragma de campo, que permite controlar el
diámetro de la parte de la preparación que queda iluminada, para evitar que exceda
el campo de observación produciendo luces parásitas.
• El espejo, necesario si la fuente de iluminación no está construida dentro del
microscopio y ya alineada con el sistema óptico, como suele ocurrir en los
microscopios modernos. Suele tener dos caras: una cóncava y otra plana. Goza de
movimientos en todas las direcciones. La cara cóncava se emplea de preferencia
con iluminación artificial, y la plana, para iluminación natural (luz solar).
microscopio y ya alineada con el sistema óptico, como suele ocurrir en los
microscopios modernos. Suele tener dos caras: una cóncava y otra plana. Goza de
movimientos en todas las direcciones. La cara cóncava se emplea de preferencia
con iluminación artificial, y la plana, para iluminación natural (luz solar).
• Condensador. El condensador está formado por un sistema de lentes, cuya
finalidad es concentrar los rayos luminosos sobre el plano de la preparación,
formando un cono de luz con el mismo ángulo que el del campo del objetivo. El
condensador se sitúa debajo de la platina y su lente superior es generalmente
planoconvexa, quedando la cara superior plana en contacto con la preparación
cuando se usan objetivos de gran abertura (los de mayor ampliación); existen
condensadores de inmersión, que piden que se llene con aceite el espacio entre esa
lente superior y la preparación. La abertura numérica máxima del condensador
debe ser al menos igual que la del objetivo empleado, o no se logrará aprovechar
todo su poder separador. El condensador puede deslizarse verticalmente sobre un
sistema de cremallera mediante un tornillo, bajándose para su uso con objetivos de
poca potencia.
finalidad es concentrar los rayos luminosos sobre el plano de la preparación,
formando un cono de luz con el mismo ángulo que el del campo del objetivo. El
condensador se sitúa debajo de la platina y su lente superior es generalmente
planoconvexa, quedando la cara superior plana en contacto con la preparación
cuando se usan objetivos de gran abertura (los de mayor ampliación); existen
condensadores de inmersión, que piden que se llene con aceite el espacio entre esa
lente superior y la preparación. La abertura numérica máxima del condensador
debe ser al menos igual que la del objetivo empleado, o no se logrará aprovechar
todo su poder separador. El condensador puede deslizarse verticalmente sobre un
sistema de cremallera mediante un tornillo, bajándose para su uso con objetivos de
poca potencia.
• Diafragma. El condensador está provisto de un diafragma-iris, que regula su
abertura para ajustarla a la del objetivo. Puede emplearse, de manera irregular, para
aumentar el contraste, lo que se hace cerrándolo más de lo que conviene si se
quiere aprovechar la resolución del sistema óptico.
abertura para ajustarla a la del objetivo. Puede emplearse, de manera irregular, para
aumentar el contraste, lo que se hace cerrándolo más de lo que conviene si se
quiere aprovechar la resolución del sistema óptico.
Trayectoria del rayo de luz a través del microscopio
El haz luminoso procedente de la lámpara pasa directamente a través del diafragma al
condensador. Gracias al sistema de lentes que posee el condensador, la luz es concentrada
sobre la preparación a observar. El haz de luz penetra en el objetivo y sigue por el tubo
hasta llegar al ocular, donde es captado por el ojo del observador.
condensador. Gracias al sistema de lentes que posee el condensador, la luz es concentrada
sobre la preparación a observar. El haz de luz penetra en el objetivo y sigue por el tubo
hasta llegar al ocular, donde es captado por el ojo del observador.
Propiedades del microscopio
• Poder separador. También llamado a veces poder de resolución, es una cualidad
del microscopio, y se define como la distancia mínima entre dos puntos próximos
que pueden verse separados. El ojo normal no puede ver separados dos puntos
cuando su distancia es menor a una décima de milímetro. En el microscopio viene
limitado por la longitud de onda de la radiación empleada; en el microscopio
óptico, el poder separador máximo conseguido es de 0,2 décimas de micrómetro
(la mitad de la longitud de onda de la luz azul), y en el microscopio electrónico, el
poder separador llega hasta 10 Å .
del microscopio, y se define como la distancia mínima entre dos puntos próximos
que pueden verse separados. El ojo normal no puede ver separados dos puntos
cuando su distancia es menor a una décima de milímetro. En el microscopio viene
limitado por la longitud de onda de la radiación empleada; en el microscopio
óptico, el poder separador máximo conseguido es de 0,2 décimas de micrómetro
(la mitad de la longitud de onda de la luz azul), y en el microscopio electrónico, el
poder separador llega hasta 10 Å .
• Poder de definición. Se refiere a la nitidez de las imágenes obtenidas, sobre todo
respecto a sus contornos. Esta propiedad depende de la calidad y de la corrección
de las aberraciones de las lentes utilizadas.
respecto a sus contornos. Esta propiedad depende de la calidad y de la corrección
de las aberraciones de las lentes utilizadas.
• Ampliación del microscopio. En términos generales se define como la relación
entre el diámetro aparente de la imagen y el diámetro o longitud del objeto.Esto
quiere decir que si el microscopio aumenta 100 diámetros un objeto, la imagen que
estamos viendo es 100 veces mayor linealmente que el tamaño real del objeto (la
superficie de la imagen será 100 2 , es decir 10.000 veces mayor). Para calcular el
aumento que está proporcionando un microscopio, basta multiplicar los aumentos
respectivos debidos al objetivo y el ocular empleados. Por ejemplo, si estamos
utilizando un objetivo de 45X y un ocular de 10X, la ampliación con que estamos
viendo la muestra será: 45X x 10X = 450X, lo cual quiere decir que la imagen del
objeto está ampliada 450 veces, también expresado como 450 diámetros.
entre el diámetro aparente de la imagen y el diámetro o longitud del objeto.Esto
quiere decir que si el microscopio aumenta 100 diámetros un objeto, la imagen que
estamos viendo es 100 veces mayor linealmente que el tamaño real del objeto (la
superficie de la imagen será 100 2 , es decir 10.000 veces mayor). Para calcular el
aumento que está proporcionando un microscopio, basta multiplicar los aumentos
respectivos debidos al objetivo y el ocular empleados. Por ejemplo, si estamos
utilizando un objetivo de 45X y un ocular de 10X, la ampliación con que estamos
viendo la muestra será: 45X x 10X = 450X, lo cual quiere decir que la imagen del
objeto está ampliada 450 veces, también expresado como 450 diámetros.
Campo del microscopio
Se denomina campo del microscopio al círculo visible que se observa a través del
microscopio. También podemos definirlo como la porción del plano visible observado a
través del microscopio. Si el aumento es mayor, el campo disminuye, lo cual quiere decir
que el campo es inversamente proporcional al aumento del microscopio. Para medir el
diámetro del campo del microscopio con cualquiera de los objetivos se utiliza el
micrómetro, al que se hará referencia en el siguiente punto.
Microscopio y su Historia
Imagen de cristales de nieve vistos con un microscopio electrónico de barrido y coloreados
artificialmente.
Historia del microscopio
Microscopio compuesto fabricado hacia 1751 por Magny . Proviene del laboratorio del
duque de Chaulnes y pertenece al Museo de Artes y Oficios, París .
El microscopio fue inventado hacia los años 1610 , por Galileo , según los italianos, o por Zacharias Jansen , en opinión de los holandeses. La palabra microscopio fue utilizada por primera vez por los componentes de la Accademia dei Lincei , una sociedad científica a la que pertenecía Galileo y que publicaron un trabajo sobre la observación microscópica del aspecto de una abeja . Sin embargo, las primeras publicaciones importantes en el campo de la microscopía aparecen en 1660 y 1665 , cuando Malpighi prueba la teoría de Harvey sobre la circulación sanguínea al observar al microscopio los capilares sanguíneos y Hooke publica su obra Micrographia .
Tallaba él mismo sus lupas sobre pequeñas esferas de cristal, cuyos diámetros no alcanzaban el milímetro (su campo de visión era muy limitado, de décimas de milímetro).
Durante el siglo XVIII el microscopio tuvo diversos adelantos mecánicos que aumentaron su estabilidad y su facilidad de uso aunque no se desarrollaron por el momento mejoras ópticas. Las mejoras más importantes de la óptica surgieron en 1877 cuando Abbe publica su teoría del microscopio y, por encargo de Carl Zeiss , mejora la microscopía de inmersión sustituyendo el agua por aceite de cedro, lo que permite obtener aumentos de 2000. A principios de los años 1930 se había alcanzado el límite teórico para los microscopios ópticos, no consiguiendo estos aumentos superiores a 500X o 1000X. Sin embargo, existía un deseo científico de observar los detalles de estructuras celulares (núcleo, mitocondria, etc.).
El microscopio electrónico de transmisión (T.E.M.) fue el primer tipo de microscopio electrónico desarrollado. Utiliza un haz de electrones en lugar de luz para enfocar la muestra consiguiendo aumentos de 100.000 X. Fue desarrollada por Max Knoll y Ernst Ruska en Alemania en 1931 . Posteriormente, en 1942 se desarrolla el microscopio electrónico de barrido (SEM).
artificialmente.
El microscopio , de micro - (pequeño) y scopio (observar), es un instrumento que permite
observar objetos que son demasiado pequeños para ser vistos a simple vista. El tipo más
común y el primero que se inventó es el microscopio óptico . Se trata de un instrumento
óptico que contiene una o varias lentes que permiten obtener una imagen aumentada del
objeto y que funciona por refracción .
observar objetos que son demasiado pequeños para ser vistos a simple vista. El tipo más
común y el primero que se inventó es el microscopio óptico . Se trata de un instrumento
óptico que contiene una o varias lentes que permiten obtener una imagen aumentada del
objeto y que funciona por refracción .
La ciencia que investiga los objetos pequeños utilizando este instrumento se llama microscopía .
Concepto
En general, cualquier microscopio requiere los siguientes elementos: una fuente (como un haz de fotones o de electrones), una muestra sobre la que actúa dicha fuente, un receptor de la información proporcionada por la interacción de la fuente con la muestra, y un procesador de esta información (en general, un ordenador).
En general, cualquier microscopio requiere los siguientes elementos: una fuente (como un haz de fotones o de electrones), una muestra sobre la que actúa dicha fuente, un receptor de la información proporcionada por la interacción de la fuente con la muestra, y un procesador de esta información (en general, un ordenador).
Historia del microscopio
Microscopio compuesto fabricado hacia 1751 por Magny . Proviene del laboratorio del
duque de Chaulnes y pertenece al Museo de Artes y Oficios, París .
El microscopio fue inventado hacia los años 1610 , por Galileo , según los italianos, o por Zacharias Jansen , en opinión de los holandeses. La palabra microscopio fue utilizada por primera vez por los componentes de la Accademia dei Lincei , una sociedad científica a la que pertenecía Galileo y que publicaron un trabajo sobre la observación microscópica del aspecto de una abeja . Sin embargo, las primeras publicaciones importantes en el campo de la microscopía aparecen en 1660 y 1665 , cuando Malpighi prueba la teoría de Harvey sobre la circulación sanguínea al observar al microscopio los capilares sanguíneos y Hooke publica su obra Micrographia .
En 1665 Robert Hooke observó con un microscopio un delgado corte de corcho y notó que el material era poroso. Esos poros, en su conjunto, formaban cavidades poco profundas a modo de cajas a las que llamó células . Hooke había observado células muertas. Unos años más tarde, Marcelo Malpighi, anatomista y biólogo italiano, observó células vivas. Fue el primero en estudiar tejidos vivos al microscopio.
A mediados del siglo XVII un comerciante holandés, Anton Van Leeuwenhoek , utilizando microscopios simples de fabricación propia describió por primera vez protozoos, bacterias , espermatozoides y glóbulos rojos . El microscopista Leeuwenhoek, sin ninguna preparación científica, puede considerarse el fundador de la bacteriología .
Tallaba él mismo sus lupas sobre pequeñas esferas de cristal, cuyos diámetros no alcanzaban el milímetro (su campo de visión era muy limitado, de décimas de milímetro).
Con estas pequeñas distancias focales alcanzaba los 275 aumentos. Observó los glóbulos de la sangre, bacterias y protozoos; examinó por primera vez los glóbulos rojos y descubrió que el semen contiene espermatozoides. Durante su vida no reveló sus métodos secretos y a su muerte, en 1723 , 26 de sus aparatos fueron cedidos a la Royal Society de Londres .
Durante el siglo XVIII continuó el progreso y se lograron objetivos acromáticos por asociación de vidrios flint y crown obtenidos en 1740 por H. M. Hall y mejorados por Dollond . De esta época son los estudios efectuados por Newton y Euler . En el siglo XIX, al descubrirse que la dispersión y la refracción se podían modificar con combinaciones adecuadas de dos o más medios ópticos, se lanzan al mercado objetivos acromáticos excelentes.
Durante el siglo XVIII el microscopio tuvo diversos adelantos mecánicos que aumentaron su estabilidad y su facilidad de uso aunque no se desarrollaron por el momento mejoras ópticas. Las mejoras más importantes de la óptica surgieron en 1877 cuando Abbe publica su teoría del microscopio y, por encargo de Carl Zeiss , mejora la microscopía de inmersión sustituyendo el agua por aceite de cedro, lo que permite obtener aumentos de 2000. A principios de los años 1930 se había alcanzado el límite teórico para los microscopios ópticos, no consiguiendo estos aumentos superiores a 500X o 1000X. Sin embargo, existía un deseo científico de observar los detalles de estructuras celulares (núcleo, mitocondria, etc.).
El microscopio electrónico de transmisión (T.E.M.) fue el primer tipo de microscopio electrónico desarrollado. Utiliza un haz de electrones en lugar de luz para enfocar la muestra consiguiendo aumentos de 100.000 X. Fue desarrollada por Max Knoll y Ernst Ruska en Alemania en 1931 . Posteriormente, en 1942 se desarrolla el microscopio electrónico de barrido (SEM).
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